山东康德莱净化工程有限公司

山东康德莱净化更-核酸检测实验室PCR施工

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1、实验应在超净工作台或者生物安全柜内进行;


2、实验的过程中选择尺寸的手套并能及时更换,在进出不同实验区域或进行模板操作后都应更换实验服、口罩、帽子及手套,以避免不同实验区交叉污染;


3、装有PCR试剂的反应管在打开之前应先瞬时离心,将管壁及管盖上的液体离至管底,降低污染手套或加样器的风险;谨慎开启反应管,防止管内液体溅出或形成气溶胶导致污染;需要高温加热的样本,可采用封口膜进行PCR管盖密封,避免管盖应受热而发生弹开;


4、吸加试剂和模板的操作应严格按照规范要求进行,遵守“慢吸快打”原则,尽量一次性完成,忌多次抽吸,以避免气溶胶产生的交叉污染;


5、PCR试剂建议小量分装,以减少反复冻融、重复取样次数和反复使用过程中的试剂污染;多样本PCR反应时,先配制反应混合液分装至反应管中,加入样本核酸,请勿同时开盖,尽量保证单人单管,实现完全闭管操作;




6、实验试剂应与样品和PCR产物分开保存,不应放于同处;


7、PCR扩增实验完成后及时将反应管取出,用一次性手套或者塑封袋将产物反应管包裹丢弃,保证管盖紧闭;


8、实验室自配试剂(去离子水、缓冲液等)和所有使用器具在使用之前均应高压灭菌或紫外杀菌,尖、反应管等实验耗材应一次性使用。









根据实验室的具体情况编写质量体系文件,《质量手册》、《程序文件》、《作业指导书》,并保证管理体系运行有效。


管理体系的特点是应有明确的目的、规范的管理、有效的制约、的机制、能自我发展的整体。


建立完善的SOP文件,对完成各项质量活动的方法作出规定,每个SOP都应对一个或一组相互关系的活动进行描述。


每个SOP文件应说明该项质量各环节的输入、转换和输出所需的文件、物资、人员、记录以及它们与有关活动的接口关系。




明确每个环节转换过程中各项因素的要求,即由谁做、做什么、做到什么程序、达到什么要求,如何控制、形成什么记录和报告,以及相应的审批手续。


规定在质量活动中需要注意的例外或特殊情况的纠正措施。SOP应简练、明确和易懂并且工作人员熟练掌握和严格遵守。

需要注意以下问题:


实验室使用的基因扩增仪,荧光定量PCR仪都是高精度仪器。一旦仪器出现一些温度或者检测上的小偏差,则很可能对实验结果产生较大的影响。因此,学会日常保养和维护是尤为重要的。


1、仪器安置


仪器应安放在湿度较低、灰尘较少并远离水源和热源的地方,无腐蚀性气体或强磁场干扰。


环境温度建议在18~35℃之间。仪器之间应保持50cm 以上距离,降低仪器之间的影响。


2、样品台、热盖定期清洁


用95%乙醇配合棉签、无尘布等工具,清洁样品台。之后运行PCR仪,设定保持温度为50℃,约5~10min,让残余液体挥发去除。另外,热盖也应该用酒精或纯水定期清洗,确保热盖清洁,温控性能良好。对于荧光定量PCR,清洁样品台和热盖的同时,去除灰尘等杂物,保证光路清洁,降低信号干扰。


3. 使用前预热


老款的PCR仪的性能比不上新款仪器,使用前需要进行预热,不仅对仪器维护有好处,还能节约实验时间。新款的仪器升温快,但还是建议能在进行实验前预热2min,这样可以有效延长仪器的使用寿命。


4. 定期运行维护


1.PCR仪器需要定期检测,视制冷方式而定一般半年至少一次。


2.PCR反应的要求温度与实际分布的反应温度是不一致的,当检测发现各孔平均温度差偏离设置温度大于1~2℃时,可以运用温度修正法纠正PCR实际反应温度差。




3.PCR反应过程的关键是升、降温过程的时间控制,要求越短越好,当PCR仪的降温过程超过60s,就应该检查仪器的制冷系统,对风冷制冷的PCR仪要较地清理反应底座的灰尘;对其他制冷系统应检查相关的制冷部件。


4.一般情况如能采用温度修正法纠正仪器的温度时,不要轻易打开或调整仪器的电子控制部件,必要时要请人员修理或利用仪器电子线路详细图纸进行维修。