现实生活中,我们可以通过开窗通风、佩戴口罩等防护用品来降低气溶胶传播风险。类似地,目前PCR实验室主要通过以下措施来防范和控制实验室污染:
(1)建设独立的PCR实验室,按试剂准备区、样本制备区、扩增及产物分析区进行严格分区,把低污染风险操作和高污染风险操作在空间上隔离开来。
(2)打造专门的负压通风系统,控制实验室空气从低风险区向高风险区单向流动,避免保存试剂被一次性全部污染。
(3)制定严格的实验室管理条例,控制人员物品单向流动,要求操作人员全程严格进行360度无死角全身防护。
(4)抬高实验人员门槛,需要经过上级单位规范培训、考核并获得“PCR上岗证”的人员方能上岗工作。
(5)PCR反应液分装保存,减少重复加样次数,降低试剂被污染风险。
(6)在PCR试验中加入内标、阴阳性对照等质控,监测检测结果,避免出现假阴性或假阳性。
(7)实验室温度控制在18~27℃,湿度控制在30%~70%。
(8)定期使用75%乙醇、含氯消毒剂和核酸去除剂及紫外线照射进行消毒等。
(1)渗漏密闭性:将n个PCR管加入半量墨汁,盖好盖子后放入水中,浸泡30min,没有墨汁渗出为合格。
(2)离心密闭性:将n个PCR管加入半量纯水,放入离心机,1000 rpm,30min,管盖未崩开未漏液为合格。
(3)热密闭性:将n个PCR管加入半量纯水,盖好盖子称重后放入PCR仪,设置一个常用的PCR程序,程序运行完毕后,再进行称重,PCR管未变形,管盖未崩开未漏液,前后重量未变化为合格。
(4)冷密闭性:将n个PCR管加入半量纯水,放入-20℃冰箱,24h,离心管未变形,管盖未崩开未漏液为合格。
(5)污染物质检:将n个PCR管加入半量阴性纯水,盖好盖子涡旋1 min后静置5min,作为模板进行扩增,qPCR无扩增为合格。
(6)抑制物质检:将n个PCR管分别加入弱阳性质控物,室温静置5min,然后进行提取;RNA核酸,DNA核酸,室温静置5min,作为模板进行扩增,qPCR扩增未被抑制为合格。
(7)空白荧光通透性:对于qPCR,需要考察PCR管是否有非特异性荧光信号,将n个空PCR管,盖好盖子后放入PCR仪,设置一个常用的PCR程序,程序运行完毕后,qPCR无扩增为合格。
(8)阳性荧光通透性:对于qPCR,还需要考察PCR管是否会抑制荧光的通透性,将n个含弱阳性样品和扩增试剂的PCR管,与确认无荧光干扰的PCR管,盖好盖子后放入PCR仪一同扩增,设置一个常用的PCR程序,程序运行完毕后,qPCR扩增未被抑制为合格。
(1)严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室,有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门;
(2)尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。
(3)扩增产物分析区是的扩增产物污染来源,废液不能在实验室中倾倒,必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉,用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理,如焚烧等;
(4)扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质,应特别注意实验人员的安全防护。 3.5完备的实验室配套设施
完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件,应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器,如超净工作台、离心机、加样器等。